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分子生物学服务
公司建有100平米分子实验室,配备有PCR仪、定量PCR仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。-个染色体区域可以有很多SNP位点,但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。分子组技术人员毕业于中国农业大学、华中科技大学同济医学院、浙江理工大学等高校生物医学相关,全部具有硕士研究生以上学历,熟练掌握分子生物学相关实验,可开展多种分子生物学检测服务。
分子实验室部分设备5.长可以合成多长的引物?
答:引物越长,出现问题的概率就越大。miRNA测序microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(双链)但是和siRNA密切相关。有的公司合成过120base的引物,产率很低。除非需要,建议合成片段长度不要超过80mer,按照目前的引物合成效率,80mer的粗产品,全长(还不一定正确)引物的百分比不会超过40%,后续处理还有丢失很多,的产量很低。
6.需要合成多少OD数?
答:根据实验目的确定。一般PCR扩增,2 OD引物,可以做200-500次50ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接,1 OD就足够了。转录组重测序转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mRNA的总和。但是有些研究人员,就做几次PCR,但是却要5-10 OD。做全基因构建的引物都比较长,但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长, 全长得率就越低,出错的几率就越大。超出需要之外的OD数要求,其实也是对社会资源的一种浪费,同时也从一个侧面反映了部分研究人员特别是新手的自信心不足,总觉得需要重复多次才能成功。
16.长链引物为什么出错的几率非常高?
答:引物合成时,每一步反应效率都不能达到,产生碱基插入、缺失、置换突变的因素客观条件都有一直存在。引物链越长,突变的频率累加起来就越高。分子实验介绍——印迹(Westernblot)检测通过SDS-PAGE凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。研究人员总希望合成的引物万无一失,这种心情可以理解。但是犹如PCR扩增,不可能保证扩增产物中没有突变,引物合成也不可能保证正确。要知道,引物合成中发生错误(非人为因素)的频率,比任何高保真高温聚合酶PCR扩增过程所产生的频率都要高。做引物合成,长链引物合成,您要有引物中部分引物可能有突变的思想准备。
17.如果测序发现突变,该如何处理?
答:遇到这种情况,首先和核酸合成厂家取得联系,生产人员会检查生产的原始记录,主要是核对合成序列是否和定单一致,他们在电脑中一般会保留所有原始数据。在确认引物合成序列没有输错的情况下,建议重新挑取测序,可能会找到正确的。根据经验,40个碱基以下的引物,测1-2个就可以了;40个以上的特别是用于全片段拼接合成的,就需要多测一些了。目前研究miRNA的方法主要是realtime-PCR、生物芯片技术以及第二代测序技术。一般情况下,每个突变的位点都不一样,提示正确的总是有的,就是如何找到它。也可以要求公司将引物免费重合一次,不过重合的引物和次的引物一样,都可能含突变,不会因为重合的引物就减少您的遇到问题的几率。基因拼接过程中,如果发现一段区域突变点不多,就多测几个,否则就重合一下引物。